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你了解熒光染色原理知識(shí)嗎

更新時(shí)間:2021-08-06      點(diǎn)擊次數(shù):9142
CytekTM Aurora光譜流式可配置高達(dá)5激光,3個(gè)散射光和64個(gè)熒光檢測通道,能夠滿足所有實(shí)驗(yàn)室的需求。Aurora可以使用大量的熒光染料組合而無需為每個(gè)應(yīng)用重新設(shè)置儀器。光學(xué)系統(tǒng)和低噪音的電子系統(tǒng)帶來了*的靈敏度和分辨率。擁有平頂光斑設(shè)計(jì),結(jié)合*的液流系統(tǒng),充分保證了高流速采集樣本的出色性能。
熒光染色原理:
免疫熒光染色:細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)的抗原分子與相應(yīng)的熒光素標(biāo)記McAb作用一定時(shí)間后形成帶有熒光素的抗原抗體復(fù)合物,經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出特定的熒光,其熒光強(qiáng)度與被測定抗原分子含量呈比例關(guān)系,由此可求得被測細(xì)胞與標(biāo)記McAb相對應(yīng)抗原的表達(dá)量和陽性細(xì)胞百分比。
常用的熒光染料有異硫氰酸熒光素(FITC)、藻紅蛋白(PE)、別藻青蛋白(APC)和Perdinin葉綠素(PerCP)等,經(jīng)488nm激光激發(fā)后其發(fā)射熒光光譜有差別,因而可將其用于標(biāo)記不同的McAb進(jìn)行單色或多色免疫熒光染色。目前,流式細(xì)胞術(shù)有單色、雙色、三色、四色、五色熒光分析,對細(xì)胞的分析更加精密、深入。
免疫熒光染色常用方法:
直接免疫熒光法:用一種(單色)或者多種(多色)熒光素標(biāo)記的McAb染色細(xì)胞后測量其熒光強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)。
間接免疫熒光法:用一種McAb與細(xì)胞作用后,洗去未結(jié)合McAb,再加入熒光素標(biāo)記的第二抗體(如羊抗鼠IgG-FITC),染色細(xì)胞后測量其熒光強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)。
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